近日，第四军医大学西京医院采用细胞内PCR扩增抗体基因的方法，成功构建一库容量为3×106 白癜风的噬菌体抗体库。该抗体库的建立，为进一步研究自身抗体在 白癜风发生发展过程中的作用及其治疗提供了崭新的思路。
据介绍，白癜风是一种常见的皮肤色素脱失性疾病。近年来有研究表明，白癜风与自身免疫密切相关，其患者体内存在抗黑素细胞膜自身抗体，导致黑素细胞破坏，引起自身损伤。然而，对于“自身抗体在疾病发生发展中究竟是始动因素还是继发反应”这一问题一直存在争议。 为探讨自身抗体机制的新思路，刘玲等研究人员采用细胞内PCR扩增的方法，选择100例（男48例，女52例，平均年龄21岁，平均病程两个月）进展期白癜风患者血样，通过PCR1反转录、扩增轻链和重链可变区基因、Cre重组酶介导、单个细胞内轻重连接获取体内原始配对信息，以及经振荡筛选等系列技术处理后，成功地构建出一库容量为3×106的白癜风噬菌体抗体库。
该抗体库经抗体表达、特异性检测及吸附筛选等检验，结果显示：细胞内PCR扩增ScFv基因，目的条带为800bp，与预期大小相符；取20个单菌落提取质粒进行凝胶电泳，19个可见800bp目的条带，重组率达95%。通过4轮“亲和吸附-洗脱-扩增”筛选，特异性噬菌体抗体回收率增加约67倍，并获得1株特异性针对黑素细胞膜抗原的抗体。提示抗体库具有重组率高、特异性强、亲和力好、抗体基因信息准确等特点。 研究人员认为，细胞内PCR技术，是一种全新的扩增抗体可变区基因方法，它在同一个载体上的轻链与重链的配对，不是人工随机组合，而是在体内的原始配对，从人免疫细胞中扩增体内亲本配对的单链抗体可变区基因，克隆到噬菌体载体，同时利用完整细胞筛选特异性针对黑素细胞膜抗原的自身抗体，从而得到编码疾病相关抗体基因的准确信息。采用该技术能从分子水平上阐述自身抗体的产生机制、编码基因规律及基因突变特点。
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